在中學教材中關于“DNA的粗提取與鑒定”這一實驗的實際操作過程中，雖然現象明顯，但存在幾個問題:實驗材料成本高［1］;操作步驟較復雜;需要儀器較昂貴等。因此，一般中學很難開展［2］。針對上述問題，本實驗做了部分改進，實驗分別選用了新鮮的菜花和蒜黃作為材料，進行比較實驗，試圖達到材料來源廣，試劑用量少，所需儀器少，操作更簡單，結果較明顯，一般普通中學均能開設的目的。從而有利該實驗普及推廣，讓更多的中學生能從植物材料中提取DNA，增加學生的感性認識，提高學生的動手能力。

1材料和方法

(1)材料

菜花和蒜黃。

(2)實驗方法

以經典的SDS提取方法［3］為對照:①分別稱取在－20℃條件下保存的兩種植物組織10g，在液氮的冷凍下迅速研磨成粉末。②加入提取液(100mMTris•HClpH8.5，100mMNaCl，50mMEDTApH8.0，2%SDS)20mL，充分研磨混勻，用兩層紗布過濾，用移液器分別吸取5mL濾液于10mL的離心管中。③將離心管置于65℃水浴中30min，水浴過程中溫和混勻幾次。④取出離心管，每管加入等體積的氯仿-異戊醇(V/V=1∶1)溶液，混勻后，10000rpm離心10min。⑤小心將上清液移入另一離心管中，不要吸入雜質，重復步驟④，將上清液小心移入另一新的離心管中。⑥加入0.6倍體積的異丙醇，輕輕混勻，靜置一段時間。6000rpm離心2min，倒去上清液，吹干。⑦用70%乙醇沖洗1次，然后用6000rpm離心2min。⑧吹干后加入2mL的100xTE，溶解。⑨貼上標簽于－20℃冰箱保存。對照上述步驟對DNA提取做表1處理。

(3)鑒定DNA

①二苯胺鑒定法［4］吸取各種處理的DNA溶解液0.75mL于5mL的試管中，再加入0.75mL配好的二苯胺溶液，置于100℃沸水浴中10min，觀察離心管中顏色的變化。二苯胺溶液中加入DNA后會變藍，DNA所含量越多，藍色就越深。②分光光度計鑒定法吸取各種處理的DNA溶解液0.5mL于比色皿中，加入1mL的水溶液，再在另一只同樣的比色皿中加入1.5mL的水溶液作空白對照，測定不同處理的DNA在260nm和280nm處的吸光值［5］。

2實驗結果與分析

(1)不同材料對DNA濃度的影響

菜花剪成小塊不易研磨，可能存在研磨不充分，提取量少等問題，這樣對DNA的濃度會有一定影響。而蒜黃剪成小段后，研磨明顯比菜花充分，提取量較多，但蒜黃中含有的多糖物質較多，也會影響DNA的濃度。但就操作角度來看，采用蒜黃較好。

(2)不同處理方法對DNA提取的影響

溫度、液氮、氯仿-異戊醇和離心機等都是影響DNA提取的重要因素。因此本實驗采用不同的處理方法來探討DNA的提取，以達到優化實驗的目的。①溫度對DNA提取很重要，低溫能更好地保持DNA不降解，見表2。液氮可使材料研磨充分。②氯仿-異戊醇起到了抽提蛋白質的作用，能很好地去除所提溶液中的雜質，最后提出來的DNA濃度和純度均較好。③用靜置的方法代替離心機，比較符合現在許多中學的現狀，即靜置后小心用吸管吸取上清液轉移到干凈的小燒杯中，能夠達到良好的提取效果。④加入異丙醇沉淀DNA，沉淀效果更好，而且用量是0.6倍的上清液的體積，菜花和蒜黃的效果都比較好，總體效果比加2倍體積的無水乙醇得到的沉淀更多。

(3)DNA鑒定

二苯胺鑒定法是中學常用的方法，此方法操作簡單，現象明顯。本實驗中－20℃條件，氯仿-異戊醇的處理和異丙醇沉淀的DNA含量較多，能使二苯胺溶液變得較藍。說明DNA含量較高，通過分光光度計檢測260nm/280nm為1.75～2.0之間，純度較高，達到實驗的要求。

3討論

提取DNA的方法有許多，常見的有CTAB法和SDS法等。但由于所用材料及中學實驗條件的限制，所提取的效果不盡如人意［6］。本實驗從中學實驗條件著手，就DNA的SDS經典提取方法中有幾處中學實驗條件達不到的步驟做了不同處理。

經過反復實驗，實驗材料采用蒜黃和菜花，在－20℃條件下，采用靜置的方法處理并用冷的異丙醇沉淀DNA，得到的DNA濃度和純度都較高，已經能達到中學的要求，能較好地觀察到提取出來的DNA。經過比較最終得到一種最適合于中學DNA提取實驗的方法，即采用蒜黃為實驗材料，在－20℃條件下，不用液氮，不用離心機而采用靜置，加入氯仿-異戊醇的方法。